2-[[2-Etoxi-4-(4-hidroxi-1-piperidinil) fenilo]amino]-5,11-dihidro-5,11-dimetil-6H-pirimido[4,5-b][1,4]benzodiazepina-6-

Descripción del producto:

Nombre del producto: 2-[[2-Etoxi-4-(4-hidroxi-1-piperidinil) fenilo]amino]-5,11-dihidro-5,11-dimetil-6H-pirimido[4,5-b][1,4]benzodiazepina-6-uno CAS NO:1234480-50-2

Sinónimos:

XMD 8-92 (base libre);

6H-pirimido[4,5-b][1,4]benzodiazepina-6-uno,2-[[2-etoxi-4-(4-hidroxi-1-piperidinil)fenil]amino]-5,11-dihidro-5,11-dimetil-;

Propiedades químicas y físicas:

Apariencia: polvo blanco a casi blanco

Análisis: ≥98,0%

Densidad:1.3 g/cm3

Punto de ebullición:7410,8 °C a 760 mmHg.

Punto de inflamación:402.4°C

En Vitro

XMD8-92 exhibe la mayor afinidad hacia BMK1 con una constante de disociación medida (Kd) de 80 nM, mientras que DCAMKL2, TNK1 y PLK4 exhiben Kd?? de 190, 890 y 600 nM, respectivamente.XMD8-92 se perfila contra todas las quinasas detectables en lisatos celulares HeLa utilizando el método KiNativ y se encuentra que es aproximadamente 10 veces más selectivo para BMK1 con una IC50 de 1..5 μM que los objetivos fuera más potentes, TNK1 (IC50=10 μM) y ACK1 (también conocido como TNK2, IC50=18 μM).El MEK5 no es inhibido significativamente por XMD8-92 hasta 50 μM[1]XMD8-92 muestra una alta selectividad para BMK1 en un ensayo de unión competitiva en el sitio ATP in vitro contra 402 quinasas, así como en el método KiNativ contra todas las quinasas detectables en lisatos de células HeLa.XMD8-92 bloquea la activación de BMK1 inducida por el EGF con IC50 de 240 nM y, con una concentración de hasta 5 μM, XMD8-92 no tiene ningún efecto inhibidor sobre la activación de ERK1/2 por el EGF[2].

En vivo

El XMD8-92 inhibe significativamente el crecimiento del tumor in vivo en un 95%. La farmacocinética de XMD8-92 se evalúa en ratas Sprague-Dawley a las que se les administra una sola dosis intravenosa o oral.0 horas de tiempo de eliminación de 26 ml/min/kgXMD8-92 tiene una distribución tisular moderada con un volumen de distribución calculado de 3,4 L/ kg. XMD8-92 tiene una alta biodisponibilidad oral con un 69% de la dosis absorbida.Después de una dosis oral única de 2 mg/kgEn los experimentos de tolerabilidad, las concentraciones plasmáticas máximas de aproximadamente 500 nM se observan a los 30 minutos, quedando 34 nM 8 horas después de la dosis.Las concentraciones plasmáticas elevadas del fármaco (aproximadamente 10 μM después de una dosis IP de 50 mg/ kg) se mantienen durante los 14 días.. XMD8-92 parece ser bien tolerado y los ratones parecían sanos sin signos de angustia. No se observó inestabilidad vascular en los ratones tratados con XMD8-92 [1].El tratamiento con XMD8-92 tanto en ratones inmunocompetentes como en ratones inmunodeficientes bloqueó el crecimiento de los tumores de xenótransplante pulmonar y cervical., respectivamente, en un 95%. This remarkable anti-tumor effect of XMD8-92 in lung and cervical xenograft tumor models is due to XMD8-92’s capacity to inhibit tumor cell proliferation through the PML suppression-inducted p21 checkpoint proteinAdemás, el nocaut de BMK1 en ratones conduce a la eliminación completa e irreversible de la proteína BMK1,mientras que el tratamiento con XMD8-92 en ratones sólo suprime la actividad de BMK1En segundo lugar, la inestabilidad vascular observada en ratones KO BMK1 puede deberse a la falta del dominio no quinasa C-terminal de BMK1,que todavía está presente durante el tratamiento de animales con XMD8-92 [2].

Ensayos de la cinasa

El perfil KiNativ de XMD8-92 se realiza con ATP y ADP acilfosfato-destiobiotina con las siguientes modificaciones.Los lisatos de células HeLa (5 mg/ml de proteína total) se incuban en presencia de XMD8-92 a 50 μM., 10 μM, 2 μM, 0,8 μM y 0 μM durante 15 minutos antes de la adición de la sonda de acilfosfato de ATP o ADP (5 μM de concentración final de la sonda).Las reacciones de la sonda se produjeron durante 10 minutos y la reacción se detuvo con la adición de urea y se procesó para el análisis de la EM.. Samples are analyzed by LC-MS/MS on a linear ion trap mass spectrometer using a time segmented “target list” designed to collect MS/MS spectra from all kinase peptide-probe conjugates that can be detected in HeLa cell lysatesEsta lista de objetivos se genera y valida mediante un análisis previo exhaustivo de los lisatos de HeLa.Se utilizan hasta cuatro iones de fragmento característicos para cada conjugado de sonda-péptido de quinasa para extraer señales para cada quinasa, y una comparación de los lisatos tratados con inhibidores con los de control (no tratados) permiten determinar con precisión el porcentaje de inhibición en cada punto.Un manuscrito que describe los detalles de este enfoque de espectrometría de masas dirigida está en preparación.[1].

Administración de animales

Los ratones[1] 5×105 células HeLa se resuspenden en DMEM e inyectan por vía subcutánea en el flanco derecho de ratones Nod/Scid de 6 semanas de edad (día 0).Los ratones se clasifican aleatoriamente en 2 grupos (6 animales).El grupo de XMD8-92 (1-28 días) es tratado con XMD8-92 a una dosis de 50 mg/ kg dos veces al día por vía intraperitoneal.El grupo control recibe inyecciones diarias de la solución portadora como control.Al día 7, el grupo de control se divide aleatoriamente en 2 grupos (6 animales, XMD8-92, día 7-28, y 12 animales, control).el resto del grupo de control se divide al azar en 2 grupos (6 animales)El tratamiento con XMD8-92 en los grupos XMD8-92 (7-28 días) y XMD8-92 (14-28 días) se inicia en el día 7 y día 14, respectivamente.El tamaño del tumor se mide con una pinza, y se determina el volumen del tumor[1].

Las referencias:

[1] Yang Q, et al. La inhibición farmacológica de BMK1 suprime el crecimiento tumoral a través de la proteína promyelocítica de la leucemia.Célula cancerosa. 2010 Sep 14;18(3):258-67.

Yang Q, et al. Dirigirse a la vía de la cinasa BMK1 MAP en la terapia del cáncer.

La kinasa ALK estimula la kinasa ERK5 para promover la expresión del oncogén MYCN en el neuroblastoma. Sci Signal. 2014 Oct 28;7 ((349):ra102.

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